ELISA實(shí)驗(yàn)不要疏忽這些操作細(xì)節(jié)

ELISA實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在科研上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。  下面將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題解決辦法總結(jié)如下：試劑要選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。標(biāo)本收集與保存：避免使用肉眼可見(jiàn)的溶血標(biāo)本、高脂標(biāo)本和混濁標(biāo)本；2-8℃下，標(biāo)本可放置24-48小時(shí)，長(zhǎng)期保存需放置-20℃下，請(qǐng)避免反復(fù)凍融。  
具體請(qǐng)參照：       
1.洗滌液：用前配制，有的試劑盒會(huì)標(biāo)明，配好的4度下一般可以放一個(gè)月，如果沒(méi)有標(biāo)明，盡量用新鮮的，不要多配制；
2.顯色液（有A液和B液的），用前15分鐘配制；  
3.標(biāo)準(zhǔn)品：有的試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)品是已經(jīng)配制好的，4度保存，有的是要現(xiàn)配制的，按照說(shuō)明書(shū)操作；  
4.濃縮生物素結(jié)合的二抗和HRP：如果需要配制，試劑盒沒(méi)注明配好可以保存多久的話，盡量現(xiàn)配現(xiàn)用（用前15分鐘配制）；原則是試劑盒上沒(méi)有指出配制物的儲(chǔ)藏方式的話，應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用；不要怕麻煩；還有小瓶的管子開(kāi)蓋前要離心，以免蓋子上粘連以后總量不夠；
5.加 樣：室溫溫育的試劑，特別是溫育時(shí)間比較短的實(shí)驗(yàn)操作的試劑，加樣對(duì)數(shù)據(jù)的影響比較大，特別要注意加樣問(wèn)題。  
不好的操作原因：不會(huì)正確使用加樣器； 血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣後放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))；加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。