T4 ELISA檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）主要采用競爭抑制 ELISA原理，用于定量檢測生物樣本中的甲狀腺素（T4），核心結(jié)論為：顏色深淺與樣本 T4 濃度成反比，在 450 nm 讀取吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度；主流規(guī)格為 48T/96T，2–8℃避光保存，多數(shù)產(chǎn)品僅供科研使用。
檢測原理（競爭法）
包被：酶標(biāo)板預(yù)包被 T4 半抗原或抗 T4 抗體。
競爭結(jié)合：加入樣本（含 T4）與標(biāo)記抗原（如生物素化 T4），兩者競爭結(jié)合固相抗體；樣本 T4 濃度越高，標(biāo)記抗原結(jié)合越少。
洗滌：去除未結(jié)合的游離成分。
顯色：加入酶標(biāo)二抗 / 親和素（HRP 標(biāo)記），與結(jié)合的標(biāo)記抗原形成復(fù)合物；加 TMB 底物顯藍(lán)色。
終止與讀數(shù)：加終止液變黃，450 nm 測 OD 值；OD 值與 T4 濃度負(fù)相關(guān)。
線性范圍：0.62-40 ng/mL
1. 預(yù)期用途
本試劑盒設(shè)計(jì)用于定量檢測血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清、細(xì)胞裂解物等樣本中的待測物濃度，僅供研究使用，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
2. 檢測原理
試劑盒采用競爭法原理：將合成半抗原包被于酶標(biāo)板上，同時(shí)加入樣品和抗體試劑（一抗），樣品中的待測物與半抗原上偶聯(lián)的待測物競爭結(jié)合抗體（一抗），結(jié)合形成“半抗原-抗體"免疫復(fù)合物，清洗去除游離的免疫復(fù)合物后，加入TMB顯色，樣本中待測物濃度越高藍(lán)色越淺，加入終止液，用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物含量呈反比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中待測物的濃度。
3. 包含的實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料
名 稱 Label | 組成成分 Kit Components | 數(shù)量（48T） Quantity | 數(shù)量（96T） Quantity |
酶標(biāo)板 | 預(yù)包被半抗原的酶標(biāo)板 | 8×6條 | 8×12條 |
校準(zhǔn)品（10×） | 10倍濃縮校準(zhǔn)品（400 ng/mL） | 1支×200μL | 1支×300μL |
一抗抗體 | 即用型檢測抗體 | 1支×3mL | 1支×6mL |
酶標(biāo)二抗 | HRP標(biāo)記二抗抗體 | 1瓶×6mL | 1瓶×12mL |
通用稀釋液（20×） | 樣品/校準(zhǔn)品/一抗抗體通用稀釋液 | 1支×10mL | 1支×15mL |
濃縮洗液（20×） | 20倍濃縮洗液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
顯色劑 | TMB | 1支×6mL | 1支×10mL |
終止液 | 稀硫酸 | 1支×3mL | 1支×6mL |
如需單獨(dú)采購通用型組分，請?zhí)峁?yīng)的組分名稱。
4. 需要但未包含的實(shí)驗(yàn)材料
· 蒸餾水或去離子水，一次性離心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套槍頭；
· 燒杯、量筒、試劑瓶等容器具；
· 用于封貼微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振蕩器（如有需要）、離心機(jī)、旋渦振蕩器等輔助設(shè)備；
· 恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)。
5. 試劑的準(zhǔn)備及儲(chǔ)存
· 1×洗液的配制：濃縮洗液（20×）如有晶體析出，需在37℃下加熱至晶體全部溶解后使用。用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL濃縮洗滌液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。
· 1×通用稀釋液的配制：用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL的20×濃縮通用稀釋液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。
· 工作校準(zhǔn)品的配制：校準(zhǔn)品開封前應(yīng)離心30秒，確保所有校準(zhǔn)品集中于底部；
準(zhǔn)備7個(gè)離心管，將10×校準(zhǔn)品按需吸取一定量用“1×通用稀釋液"稀釋10倍配制成校準(zhǔn)品S1。例：50uL的10×校準(zhǔn)品+450uL的“1×通用稀釋液"，制備得到500μL的S1濃度校準(zhǔn)品。在隨后的6個(gè)離心管中分別加入250μL的“1×通用稀釋液"，在這6個(gè)試管中（S2~S7）將S1校準(zhǔn)品依次倍比稀釋6個(gè)梯度至S7，共配制7個(gè)濃度的校準(zhǔn)品，依次為：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如下圖所示，“1×通用稀釋液"作為零濃度校準(zhǔn)品S0，共8支校準(zhǔn)品。
· 
6. 樣品采集、預(yù)處理及儲(chǔ)存
· 血清：使用血清采集管采集全血，室溫靜置待血細(xì)胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下離心15分鐘取得血清。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血清應(yīng)及時(shí)進(jìn)行檢測，如不能及時(shí)進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲(chǔ)存在-20℃及以下溫度條件，儲(chǔ)存時(shí)間不超過6個(gè)月，樣品凍融不超過2次。
· 血漿：使用EDTA或肝素采血管收集血漿。全血采集后以1000×g離心15分鐘取得血漿。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血漿應(yīng)及時(shí)進(jìn)行檢測，如不能及時(shí)進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲(chǔ)存在-20℃及以下溫度條件，儲(chǔ)存時(shí)間不超過6個(gè)月，樣品凍融不超過2次。
· 組織：組織稱重后剪碎，將剪碎的組織加入裂解液，一般按1:4-1:9的重量體積比，比如100mg的組織樣品對應(yīng)400uL的裂解液，具體可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，最后將勻漿液于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。
· 細(xì)胞：取適量細(xì)胞，于冰上進(jìn)行超聲破碎，5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。
· 細(xì)胞上清：取細(xì)胞上清于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。
7. 實(shí)驗(yàn)步驟
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右，也可置于37℃溫箱快速回溫至室溫。
注意：酶標(biāo)板未恢復(fù)室溫前，請勿開封。
1 | 每孔加入校準(zhǔn)品/待測樣品50μL，之后每孔再加入一抗抗體工作液50uL。 |
2 | 蓋上封板膜，在37℃下孵育60分鐘。 |
3 | 洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍干。 |
4 | 每孔加入100μL酶標(biāo)二抗。 |
5 | 蓋上封板膜，在37℃下孵育30分鐘。 |
6 | 洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍干。 |
7 | 每孔加入100μL顯色液 |
8 | 37℃下避光孵育15分鐘。 |
9 | 每孔加入50μL終止液。 |
10 | 使用酶標(biāo)儀在450nm檢測波長及620~690nm參比波長條件下測定吸光度值，如果沒有參比波長則僅選擇450nm波長進(jìn)行檢測。如果最高濃度校準(zhǔn)品OD值過高，應(yīng)立即在405/630nm雙波長條件下檢測。 |
8. 結(jié)果計(jì)算
建議使用四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合：以濃度值為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)；
建議使用專業(yè)化軟件進(jìn)行結(jié)果擬合和計(jì)算，如ELISA CALC、SPSS、Graphpad Prism等。示例數(shù)據(jù)
以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
9. 檢測的局限性
樣本濃度超出檢測范圍上，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)后再次檢測，計(jì)算結(jié)果應(yīng)當(dāng)乘上稀釋倍數(shù)。樣本濃度低于LOQ定量，檢測結(jié)果無法進(jìn)行準(zhǔn)確定量。
10. 產(chǎn)品性能指標(biāo)
以下結(jié)果基于校準(zhǔn)品的濃度值實(shí)驗(yàn)得出，未納入基質(zhì)效應(yīng)等其他因素的潛在影響。
靈敏度：0.38ng/mL。
精密度：板內(nèi)精密度CV＜10%（N=20），板間精密度CV＜15%（N=20）。
特異性（Analytical specificity）：其他相關(guān)因子在稀釋緩沖液中制備為10μg/mL測定，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。?
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更新時(shí)間：2026-03-04 
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